Аффинная хроматография

АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ (от латинского affinis - сопредельный, сопричастный) (биоспецифическая хроматография), метод анализа, разделения, очистки и выделения биологически активных веществ (нуклеиновых кислот, ферментов, антител, рецепторных белков, гормонов и др.), в основе которого лежит их биоспецифическое взаимодействие со стационарным лигандом, иммобилизованным на хроматографическом сорбенте; один из вариантов колоночной жидкостной хроматографии. Наиболее широко аффинная хроматография применяется для выделения и очистки ферментов, где в качестве стационарных лигандов используют ингибиторы ферментов, коферменты, аналоги субстратов. Аффинная хроматография сформировалась как метод в конце 1960-х годов. Расцвет аффинной хроматографии связан с бурным развитием биотехнологии и молекулярной биологии в 1970-е годы. Были реализованы промышленные схемы выделения методом аффинной хроматографии ряда белков - инсулина, интерферона, гормона роста, а также многих ферментов - протеаз, рибонуклеаз, липаз, ацилаз и др.

В аффинной хроматографии для иммобилизации стационарного лиганда (за счёт ковалентного взаимодействия, реже - физической адсорбции) используют различные сорбенты - сефарозу, целлюлозу, полиакриламид, пористое стекло, силикагель и пр. Главные требования к сорбенту: инертность (то есть высокая эффективность разделения обеспечивается исключительно за счёт биоспецифического взаимодействия со стационарным лигандом), стабильность в условиях эксплуатации, возможность контролируемого присоединения стационарного лиганда. Разделение осуществляют в хроматографических колонках. Целевой компонент десорбируют путём изменения ионной силы, pH или состава элюента.

Существует ряд разновидностей метода. В основе иммуноаффинной хроматографии лежит наиболее сильное и высокоспецифическое взаимодействие антитело - антиген. В так называемой группоспецифической (псевдоаффинной) хроматографии в качестве лиганда, связывающего группы родственных ферментов, используют некоторые красители (например, антрахиноновые), иммобилизованные металлокомплексы, гидрофобные группы сорбента. В этом случае эффективность разделения достигается варьированием условий сорбции и десорбции, а также конструированием в выделяемых белках специфических участков взаимодействия (например, гексагистидиновых и хитинсвязывающих фрагментов).

Лит.: Туркова Я. Аффинная хроматография. М., 1980; Kasai К., Matsumoto I., Верри М. Affinity chromatography. Tokio, 1991; Handbook of affinity chromatography. N. Y., 1993; Affinity chromatography: methods and protocols. Totowa, 2000.